Il-fażi mobbli hija ekwivalenti għall-fażi likwida tad-demm, u hemm diversi affarijiet li għandek tagħti attenzjoni waqt l-użu. Fosthom, hemm xi "iżvantaġġi" li għandhom jingħataw attenzjoni.
01. Kejjel il-pH tal-fażi mobbli wara li żżid solvent organiku
Jekk tkejjel il-pH b'addittiv organiku, il-pH li tikseb ikun differenti minn qabel ma żżid is-solvent organiku. Madankollu, l-iktar ħaġa importanti hija li tkun konsistenti. Jekk dejjem tkejjel il-pH wara li żżid is-solvent organiku, kun żgur li tiddikjara l-passi tiegħek fil-metodu li tuża sabiex oħrajn isegwu l-istess metodu. Dan il-metodu mhuwiex preċiż 100%, iżda mill-inqas se jżomm il-metodu konsistenti. Dan jista 'jkun aktar importanti milli jkollna valur tal-pH preċiż.
02. L-ebda buffer użat
L-iskop ta 'buffer huwa li jikkontrolla l-pH u ma jħallihx jinbidel. Ħafna metodi oħra jbiddlu l-pH tal-fażi mobbli, li tista 'tikkawża bidliet fil-ħin ta' żamma, forma tal-quċċata, u rispons massimu.
L-aċidu formiku, TFA, eċċ mhumiex buffers
03. Mhux qed tuża buffer fil-medda normali tal-pH
Kull buffer għandu wisa ' ta' firxa ta 'unitajiet ta' 2 pH, li fih jipprovdi l-aħjar stabbiltà tal-pH. Buffers barra din it-tieqa mhux se jipprovdu reżistenza effettiva għall-bidliet fil-pH. Jew uża buffer fil-medda t-tajba, jew agħżel buffer li jkopri l-firxa tal-pH li għandek bżonn.
04. Żid buffer mas-soluzzjoni organika
It-taħlit ta' soluzzjoni buffer ma' fażi organika x'aktarx jikkawża li l-buffer jippreċipita. F'ħafna każijiet, anki jekk tkun seħħet il-preċipitazzjoni, xorta huwa diffiċli li tinstab. Ftakar li dejjem iżżid is-soluzzjoni organika mal-fażi milwiema, li tista 'tnaqqas ħafna ċ-ċans ta' preċipitazzjoni buffer.
05. Ħallat il-gradjent tal-konċentrazzjoni minn 0% b'pompa
Pompi disponibbli llum jistgħu effettivament iħalltu fażijiet mobbli u degas inline, iżda mhux kull min juża l-metodu tiegħek se jkollu pompa ta 'kwalità għolja. Ħallat A u B f'soluzzjoni waħda u mexxiha 100% inline.
Pereżempju, 950 ml ta 'taħlita organika tal-bidu jistgħu jiġu ppreparati billi jitħalltu ma' 50 ml ta 'ilma. Il-vantaġġ ta 'dan huwa li jista' jnaqqas il-varjabbiltà bejn HPLCs u jnaqqas il-possibbiltà ta 'bżieżaq u preċipitazzjoni fis-sistema. Ta 'min jinnota li l-proporzjon tat-taħlita tal-pompa huwa 95:5, li ma jfissirx li l-ħin ta' żamma mħallat minn qabel fil-flixkun huwa wkoll 95:5.
06. Ma tużax l-aċidu modifikat korrett (bażi) biex tbiddel il-buffer
Uża biss l-aċidu jew il-bażi li tifforma l-melħ buffer li qed tuża. Pereżempju, buffer tal-fosfat tas-sodju għandu jiġi ppreparat b'aċidu fosforiku jew idrossidu tas-sodju biss.
07. Mhux tiddikjara l-informazzjoni kollha dwar il-buffer fil-metodu, bħaż-żieda ta '5g ta'fosfat tas-sodju għal 1000ml ilma.
It-tip ta 'buffer jiddetermina l-firxa tal-pH li tista' tiġi buffered. Il-konċentrazzjoni meħtieġa tiddetermina s-saħħa tal-buffer. 5 grammi jew fosfat tas-sodju anidru u 5 grammi ta 'monoidrat ta' fosfat monosodju għandhom saħħiet buffer differenti.
08. Żieda ta 'solventi organiċi qabel l-iċċekkjar
Jekk il-metodu preċedenti uża soluzzjoni buffer għal-linja bażi B, u l-metodu tiegħek juża soluzzjoni organika għal-linja bażi B, tista 'tittama li tissetilja l-buffer fit-tubi tal-pompa u fir-ras tal-pompa.
09. Neħħi l-flixkun u vojta l-aħħar qatra
Hemm ċans tajjeb li ma jkollokx biżżejjed fażi mobbli biex tlesti l-ġirja kollha u l-kampjun tiegħek se jpejjep. Minbarra l-possibbiltà li tinħaraq is-sistema tal-pompa u l-kolonna, il-fażi mobbli se tevapora kompletament u l-fażi mobbli fil-quċċata tal-flixkun tinbidel.
10. Uża fażi mobbli ta 'degassing ultrasoniku
L-iktar punt importanti huwa li tiżgura li l-melħ tal-buffer kollha jinħall, iżda dan huwa l-agħar mod biex jitneħħa l-gass u se jsaħħan malajr il-fażi mobbli, u jikkawża li l-komponenti organiċi jevaporaw. Biex tiffranka problemi mhux meħtieġa aktar tard, ħu ħames minuti biex tiffiltra l-fażi mobbli tiegħek bil-vakwu.
Ħin tal-post: Awissu-27-2024