Prinċipji u Metodi ta 'Analiżi Kwantitattiva bil-Kromatografija Likwida

Il-mekkaniżmu ta 'separazzjoni tal-kromatografija likwida huwa bbażat fuq id-differenza fl-affinità tal-komponenti fit-taħlita għaż-żewġ fażijiet.

Skont il-fażijiet stazzjonarji differenti, il-kromatografija likwida hija maqsuma f'kromatografija likwidu-solidu, kromatografija likwidu-likwidu u kromatografija fażi magħquda.L-aktar użati huma kromatografija likwidu-solidu bil-ġel tas-silika bħala mili u kromatografija tal-fażi magħquda bil-mikrosilika bħala matriċi.

Skont il-forma ta 'fażi stazzjonarja, il-kromatografija likwida tista' tinqasam f'kromatografija ta 'kolonna, kromatografija tal-karta u kromatografija ta' saff irqiq.Skont il-kapaċità ta 'assorbiment, tista' tinqasam f'kromatografija ta 'adsorbiment, kromatografija ta' partizzjoni, kromatografija ta 'skambju joniku u kromatografija ta' permeazzjoni tal-ġel.

F'dawn l-aħħar snin, ġiet miżjuda sistema ta 'fluss ta' likwidu bi pressjoni għolja mas-sistema tal-kromatografija tal-kolonna likwida biex tagħmel il-fluss tal-fażi mobbli malajr taħt pressjoni għolja biex ittejjeb l-effett ta 'separazzjoni, għalhekk kromatografija likwida ta' effiċjenza għolja (magħrufa wkoll bħala bi pressjoni għolja) ħareġ.

PARTI
01 Prinċipju ta' Analiżi Kwantitattiva tal-Kromatografija Likwida

Biex jiġu kkwantifikati fuq il-bażi ta' kwalitattivi, sustanzi puri huma meħtieġa bħala standards;

Il-kwantifikazzjoni tal-kromatografija likwida hija metodu relattivament kwantitattiv: jiġifieri, l-ammont tal-analite fit-taħlita huwa stmat minn ammont magħruf ta 'kampjun standard pur

PARTI
02 Bażi għall-Kwantifikazzjoni bil-Kromatografija Likwida

L-ammont tal-komponent imkejjel (W) huwa proporzjonali għall-valur tar-rispons (A) (għoli tal-quċċata jew erja tal-quċċata), W=f×A.

Fattur ta 'korrezzjoni kwantitattiva (f): Hija l-kostanti tal-proporzjonalità tal-formula tal-kalkolu kwantitattiv, u t-tifsira fiżika tagħha hija l-ammont tal-komponent imkejjel rappreżentat mill-valur tar-rispons tal-unità (żona tal-quċċata).

Il-fattur ta 'korrezzjoni kwantitattiva jista' jinkiseb mill-ammont magħruf ta 'kampjun standard u l-valur tar-rispons tiegħu.

Kejjel il-valur tar-rispons tal-komponent mhux magħruf, u l-ammont tal-komponent jista 'jinkiseb mill-fattur ta' korrezzjoni kwantitattiva.

PARTI
03 Termini komuni fl-analiżi kwantitattiva

Kampjun (kampjun): soluzzjoni li fiha analit għall-analiżi kromatografika.Maqsuma f'kampjuni standard u mhux magħrufa.

Standard: Prodott pur b'konċentrazzjoni magħrufa.Kampjun mhux magħruf (mhux magħruf): It-taħlita li l-konċentrazzjoni tagħha għandha tiġi ttestjata.

Piż tal-kampjun: L-użin oriġinali tal-kampjun li jrid jiġi ttestjat.

Dilwizzjoni: Il-fattur ta' dilwizzjoni tal-kampjun mhux magħruf.

Komponent : il-quċċata kromatografika li għandha tiġi analizzata kwantitattivament, jiġifieri, l-analite li l-kontenut tiegħu mhux magħruf.

Ammont ta' komponent (ammont): il-kontenut (jew konċentrazzjoni) tas-sustanza li trid tiġi ttestjata.

Integerity : Il-proċess ta' komputazzjoni tal-kejl tal-ogħla żona ta' quċċata kromatografika permezz ta' kompjuter.

Kurva tal-kalibrazzjoni: Kurva lineari tal-kontenut tal-komponent kontra l-valur tar-rispons, stabbilita minn ammont magħruf ta' sustanza standard, użata biex tiddetermina l-kontenut mhux magħruf tal-analite.

PARTI
04 Analiżi Kwantitattiva tal-Kromatografija Likwida

1. Agħżel metodu kromatografiku adattat għall-analiżi kwantitattiva:

l Ikkonferma l-quċċata tal-komponent misjub u tikseb riżoluzzjoni (R) akbar minn 1.5

l Iddetermina l-konsistenza (purità) tal-qċaċet kromatografiċi tal-komponenti ttestjati

l Iddetermina l-limitu ta 'skoperta u l-limitu ta' kwantifikazzjoni tal-metodu;sensittività u firxa lineari

2. Stabbilixxi kurva ta 'kalibrazzjoni b'kampjuni standard ta' konċentrazzjonijiet differenti

3. Iċċekkja l-eżattezza u l-preċiżjoni tal-metodi kwantitattivi

4. Uża s-softwer tal-ġestjoni tal-kromatografija korrispondenti biex timplimenta l-ġbir tal-kampjuni, l-ipproċessar tad-dejta u tirrapporta r-riżultati

PARTI
05 Identifikazzjoni tal-qċaċet kwantitattivi (kwalitattivi)

Identifika kwalitattivament kull quċċata kromatografika li trid tiġi kkwantifikata

L-ewwel, uża l-kampjun standard biex tiddetermina l-ħin ta 'ritenzjoni (Rt) tal-quċċata kromatografika li trid tiġi kkwantifikata.Billi tqabbel il-ħin taż-żamma, sib il-komponent li jikkorrispondi għal kull quċċata kromatografika fil-kampjun mhux magħruf.Il-metodu kwalitattiv kromatografiku huwa li jitqabbel il-ħin ta 'żamma mal-kampjun standard.Il-kriterju Insuffiċjentikonferma ulterjuri (kwalitattiva)

1. Metodu ta 'żieda standard

2. Uża metodi oħra fl-istess ħin: metodi kromatografiċi oħra (ibiddlu l-mekkaniżmu, bħal: bl-użu ta 'kolonni kromatografiċi differenti), ditekters oħra (PDA: paragun tal-ispettru, tfittxija tal-librerija tal-ispettru; MS: analiżi tal-ispettru tal-massa, tfittxija tal-librerija tal-ispettru)

3. Strumenti u metodi oħra

PARTI
06 Konferma tal-Ogħla Konsistenza Kwantitattiva

Ikkonferma l-ogħla konsistenza kromatografika (purità)

Kun żgur li hemm komponent wieħed biss imkejjel taħt kull quċċata kromatografika

Iċċekkja għal interferenza minn sustanzi ko-elutanti (impuritajiet)

Metodi għall-Konferma tal-Ogħla Konsistenza Kromatografika (Purità)

Tqabbil ta' Spettrogrammi ma' Intraċċaturi tal-Matriċi tal-Photodiode (PDA).

Identifikazzjoni tal-Ogħla Purità

2996 Teorija tal-Angolu tal-Purità

Metodi kwantitattivi komunement użati fil-PARTI 07

Metodu tal-kurva standard, maqsum f'metodu standard estern u metodu standard intern:

1. Metodu standard estern: l-aktar użat fil-kromatografija likwida

Serje ta' kampjuni standard ta' konċentrazzjonijiet magħrufa ġew ippreparati bl-użu ta' kampjuni puri tal-komposti li għandhom jiġu ttestjati bħala kampjuni standard.injettat fil-kolonna sal-valur tar-rispons tagħha (l-ogħla żona).
F'ċerta firxa, hemm relazzjoni lineari tajba bejn il-konċentrazzjoni tal-kampjun standard u l-valur tar-rispons, jiġifieri W= f×A , u ssir kurva standard.

Taħt l-istess kundizzjonijiet sperimentali eżatti, injetta l-kampjun mhux magħruf biex tikseb il-valur tar-rispons tal-komponent li jrid jitkejjel.Skont il-koeffiċjent magħruf f , tista' tinkiseb il-konċentrazzjoni tal-komponent li għandu jitkejjel.

Il-vantaġġi tal-metodu standard estern:tħaddim u kalkolu sempliċi, huwa metodu kwantitattiv użat komunement;l-ebda ħtieġa li kull komponent jiġi skopert u eluwit;kampjun standard huwa meħtieġ;il-kundizzjonijiet tal-kejl tal-kampjun standard u l-kampjun mhux magħruf għandhom ikunu konsistenti;il-volum tal-injezzjoni għandu jkun preċiż.

Żvantaġġi tal-metodu standard estern:Il-kundizzjonijiet sperimentali huma meħtieġa li jkunu għoljin, bħas-sensittività tad-ditekter, ir-rata tal-fluss, u l-kompożizzjoni tal-fażi mobbli ma tistax tinbidel;il-volum ta' kull injezzjoni għandu jkollu ripetibbiltà tajba.

2. Metodu standard intern: preċiż, iżda idejqek, l-aktar użat f'metodi standard

Ammont magħruf tal-istandard intern huwa miżjud mal-istandard biex jagħmel standard imħallat, u jiġu ppreparati serje ta 'standards ta' ħidma ta 'konċentrazzjoni magħrufa.Il-proporzjon molari ta 'standard għal standard intern fl-istandard imħallat jibqa' mhux mibdul.Injetta fil-kolonna kromatografika u ħu (żona tal-quċċata tal-kampjun standard/erja tal-quċċata tal-kampjun standard intern) bħala l-valur tar-rispons.Skont ir-relazzjoni lineari bejn il-valur tar-rispons u l-konċentrazzjoni tal-istandard tax-xogħol, jiġifieri W= f×A , issir kurva standard.

Ammont magħruf ta' standard intern huwa miżjud mal-kampjun mhux magħruf u injettat fil-kolonna biex jinkiseb il-valur tar-rispons tal-komponent li jrid jitkejjel.Skont il-koeffiċjent magħruf f , tista' tinkiseb il-konċentrazzjoni tal-komponent li għandu jitkejjel.

Il-karatteristiċi tal-metodu standard intern:Matul l-operazzjoni, il-kampjun u l-istandard intern jitħalltu flimkien u jiġu injettati fil-kolonna kromatografika, sakemm il-proporzjon tal-ammont tal-komponent imkejjel mal-istandard intern fis-soluzzjoni mħallta jkun kostanti, il-bidla tal-volum tal-kampjun mhux se jaffettwa r-riżultati kwantitattivi..Il-metodu standard intern jikkumpensa l-influwenza tal-volum tal-kampjun, u anke l-fażi mobbli u d-ditekter, għalhekk huwa aktar preċiż mill-metodu standard estern.

PARTI
08 Fatturi li Jaffettwaw ir-Riżultati tal-Analiżi Kwantitattiva

Preċiżjoni fqira tista' tkun ikkawżata minn:

Integrazzjoni żbaljata taż-żona tal-quċċata, dekompożizzjoni tal-kampjun jew impuritajiet introdotti waqt il-preparazzjoni tal-kampjun, kunjett tal-kampjun mhux issiġillat, volatilizzazzjoni tal-kampjun jew tas-solvent, preparazzjoni mhux korretta tal-kampjun, problemi tal-injezzjoni tal-kampjun, preparazzjoni standard interna żbaljata

Raġunijiet possibbli għal preċiżjoni fqira:

Integrazzjoni tal-quċċata mhux korretta, problemi ta' injezzjoni jew injettur, dekompożizzjoni tal-kampjun jew impuritajiet introdotti waqt il-preparazzjoni tal-kampjun, problemi kromatografiċi, rispons degradat tad-ditekter